Forskning ved Københavns Universitet - Københavns Universitet

Forside

Analysis of HPV-16 early gene regulationin cellular differentiation, includingcharacterisation of the possiblerole of CPEB proteins

Publikation: Bog/antologi/afhandling/rapportPh.d.-afhandlingForskning

  • Christina Neigaard Hansen

Livmoderhalskræft er den næst hyppigste diagnosticerede cancerform i kvinder på verdensplan. Canceren menes at være forårsaget af infektioner med høj-risiko humane papillomavira (HPVs), hvor HPV-16 er den type blandt de høj-risiko typer, der oftest identificeres i livmoderhalskræft. HPV-16 koder for 6 tidlige og 2 sene proteiner (E1, E2, E4, E5, E5, E6, E7, L1 og L2), hvoraf E6 og E7 er de vigtigste oncogener. I vores laboratorium er det tidligere blevet vist, at den mest distale del af E6/E7 messengerne fra flere HPV typer nedregulerer protein syntesen af et reporter gen via 4 cytoplasmatiske polyadenylerings elementer (CPEs) placeret i den distale del af messengerne. Disse CPE sekvenser binder det CPE-bindende protein CPEB. I dette studie er mRNA niveauerne af de 4 CPEB'er blevet analyseret i primære keratinocytter, i 8 forskellige celle linier samt både i normale og cancer genitale væv. Store variationer var observeret både blandt de forskellige celle typer og blandt de 4 CPEB'er. Et interessant fund i ovarie cancer var nedregulering i mRNA niveauet af CPEB1, et protein der tidligere er blevet foreslået til at være et tumor suppressor protein. Vi fandt også en tendens til nedregulering af CPEB3 mRNA i livmoderhalskræft, hvilket måske kunne påvirke reguleringen af E6/E7 messengerer under carcinogenesen. De to hyppige brugte interne reference markører GAPDH og U6snRNA var opreguleret i cancer væv. Derudover analyserede vi aktiviteten af promotorer, der regulere HPV-16 E6/E7 ekspressionen. HPV-16 inficerer fortrinsvis de proliferende celler i det konstant fornyende flerlagede epitel, der beklæder livmoderhalsen. Disse proliferende celler differentiere, mens de bliver skubbet opad i epitelet af nye datter celler. Virusens livs cyklus er tæt koblet til dette differentierings program, hvor de tidlige gener hovedsageligt udtrykkes i den nedre del af epitelet og sene gener i de mere differentierede celler. Vi inducerede keratinocytterne til at differentiere, for derefter at måle aktiviteten af de forskellige promotorer man maner initierer E6/E7 transcriptionen. De analyserede promotorer viste alle aftagende aktivitet under differentiering. P542 promotoren, som vi tidligere har identificeret i E6 læserammen opstrøms for E7 læserammen, var dog ikke lige så stærkt påvirket af differentieringen som promotorerne i den lange kontrol region (LCR) opstrøms for E6 læserammen. Desuden viste vi transcription fra regioner indeholdende de knap så velbeskrevne transcriptions start steder ved nt.7436 og nt.7841 i LCR.

OriginalsprogEngelsk
ForlagMuseum Tusculanum
StatusUdgivet - 2008

ID: 9906529