Forskning ved Københavns Universitet - Københavns Universitet

Forside

Dpb11/TopBP1 contributes to genomicstability via homologous recombinationand checkpoint signaling

Publikation: Bog/antologi/afhandling/rapportPh.d.-afhandlingForskning

  • Susanne Manuela Germann

Homolog rekombination (HR) er essentiel for bevarelse af genomets integritet og er

en central pathway for reparation af DNA dobbelt-strengsbrud (DSB). DPB11 er et

essentielt gen, som er bevaret fra gær til menneske (TopBP1), og er involveret i

initiering af DNA replikation og signalering af DNA skader. Vi har fundet at Dpb11

danner foci som respons til DNA dobbelt-strengsbrud i G1, S og G2 fasen in vivo.

Disse foci er afhængige af Mec3 (9-1-1 komplekset) og Rad24 (clamp loader), men

uafhængige af HR proteinet Rad52. Ikke desto mindre samlokaliserer disse foci med

Rad52 is S/G2 fasen, og et enkelt veldefineret DSB er tilstrækkeligt for rekruttering.

Ligeledes finder vi, at kyllinge homologen TopBP1 samlokaliserer med RPA1 og

Rad51 efter induktion af DNA skader.

Det er tidligere påvist, at dpb11 mutanter er følsomme overfor DNA-skadende

stoffer, som inducerer DSB, DNA alkylering eller blokerede replikationsgafler. Det er

især interessant, at vi har isoleret punktmutanter dpb11-PF og dpb11-R, som

udelukkende er følsomme overfor stoffer, der danner DSB. Disse mutanter tyder på at

Dpb11 har separate funktioner i DNA reparation og i replikation. De mutante

proteiner interagerer signifikant dårligere med medlemmer af 9-1-1 komplekset og

Rad24 clamp loaderen ved to-hybrid analyse, hvilket antyder en defekt i checkpoint

signalering. Yderligere finder vi, at Dpb11 foci er uafhængige af checkpoint kinaserne

Mec1 og Tel1, såvel som Rad9, hvilket yderligere understreger en rolle for Dpb11

tidligere end disse faktorer i cellens checkpoint respons. Herudover har dpb11-PF en

defekt i S-fase checkpoint funktion omend i mindre grad end dpb11-1 mutanten.

Ændrede rater for heteroallelisk og direct repeat rekombination tyder på en rolle for

Dpb11 i gen-konvertering. En fysisk analyse af parringstype-skift som model for

reparation af DSBs viser, at kinetikken af DSB reparation er langsommere i dpb11-PF

mutanten.

Endelig har vi vist, at Dpb11 i bagegær såvel som TopBP1 i kyllinge DT40 celler

lokaliserer til strukturer, som minder of anafase broer i mitosen, hvilket antyder at

disse proteiner deltager i at beskytte eller processere skrøbelig steder i genomet under

anafasen. Vi konkluderer at Dpb11/TopBP1 har separate funktioner i replikation,

checkpoint respons, og rekombinationsprocesser, hvorved dette protein bidrager til at

sikre genomets stabilitet.

OriginalsprogEngelsk
Udgivelses stedBiologisk Institut
ForlagMuseum Tusculanum
Antal sider175
StatusUdgivet - 2009

Bibliografisk note

Akademisk vejleder: Dr. Michael Lisby

ID: 20096595